Diederik de Rooy studeerde geneeskunde en rechtsgeleerdheid aan de Universiteit Leiden. Hij promoveerde aan dezelfde universiteit op een proefschrift over gewrichtsschade bij Reumatoïde Artritis, en deed aansluitend de opleiding tot psychiater in het Leids Universitair Medisch Centrum.  Na zijn registratie als psychiater in 2018 is hij twee jaar als ziekenhuispsychiater en onderwijscoördinator verbonden geweest aan dit ziekenhuis. Sinds 2018 is hij ook verbonden aan Transparant Leiden, sinds 2021 is hij hier geneesheer-directeur. Daarnaast verricht hij consultaties ten behoeve bedrijfs- en verzekeringsartsen via Ergatis en Priocura. Hij is redactielid van het tijdschrift GZ-psychologie, en verricht wetenschappelijk onderzoek op het gebied van patiëntveiligheid en just culture en de impact van psychiatrische aandoeningen bij professionals in de luchtvaart en andere high-performance beroepsgroepen.